---zastosowanie-na-czym-polega-technika-pcr.jpg)
PGR yra tyrimas, kuris buvo naudojamas diagnozuojant daugelį ligų. PGR metodas leidžia parodyti tiesioginį bakterijų buvimą organizme, ypač jo DNR. PGR naudojamas, inter alia, diagnozuojant Laimo ligą. Kas yra PGR technika? Kas yra realaus laiko PGR?
Turinys:
- PGR (testavimas) - kokia yra PGR technika?
- PGR (tyrimas) - PGR metodo taikymas
- PGR (tyrimai) - Laimo liga
- PGR (tyrimai) - rezultatai. Ar jie gali būti klaidingai teigiami?
- PGR (tyrimai) - rezultatai. Ar jie gali būti klaidingai neigiami
PGR (polimerazės grandininė reakcija) yra pagrindinis genetinių ir molekulinių laboratorijų metodas. Ją 1983 metais sukūrė Kara Mullis, 1993 metais už tai apdovanota Nobelio premija.
Išgirskite, kokia yra PGR testavimo technika. Tai yra ciklo KLAUSYMO GERA medžiaga. Tinklalaidės su patarimais.
Norėdami peržiūrėti šį vaizdo įrašą, įgalinkite „JavaScript“ ir apsvarstykite galimybę pereiti prie žiniatinklio naršyklės, palaikančios vaizdo įrašus
PGR (testavimas) - kokia yra PGR technika?
PGR tyrimas susideda iš konkretaus DNR fragmento, pvz., Genų, koduojančių Borrelia baltymus, daugybinio amplifikavimo (paprastai per 30–40 ciklų), naudojant polimerazės fermentą.
Tada tam, kad sustiprintas DNR fragmentas būtų matomas, naudojami specialūs molekuliniai dažikliai. PGR dėl specifinių DNR fragmentų amplifikacijos yra ypač jautrus metodas.
Taikant PGR metodą, DNR fragmentai amplifikuojami naudojant specifines pradmenų poras tam tikram bakterijos DNR regionui. Pavyzdžiui, tiksliniai PCR regionai, naudojami diagnozuojant Laimo ligą, yra baltymai koduojantys genai, pvz. 16S rDNR, recA, fla, p66, OspA.
Biologinė medžiaga, iš kurios galima atlikti bandymą, yra:
- kraujas
- odos dalis nuo migruojančios eritemos
- smegenų-stuburo skystis
- sinovijos skysčio arba iš sąnarių kremzlių
- šlapimas
PGR (tyrimas) - PGR metodo taikymas
Be Laimo boreliozės diagnostikos naudojant PGR metodą, galima aptikti specifinius kitų mikroorganizmų ar žmonių DNR fragmentus. Todėl PGR metodas taip pat naudojamas:
- virusinių infekcijų diagnostika ir stebėjimas: herpeso virusai (herpeso virusas, herpes zoster, Epstein-Barr, citomegalovirusas), ŽIV, hepatito virusai (HBV ir HCV)
- bakterinių infekcijų diagnostika ir stebėjimas, ypač tų bakterijų, kurių negalima identifikuoti pasėliu, pvz., tuberkuliozė
- navikų ligų diagnostika ir stebėjimas: leukemija, krūties vėžys, storosios žarnos vėžys, plaučių vėžys
- polinkio į vėžį diagnozė: krūties ir kiaušidžių vėžys (BRCA1 ir BRCA2 genai), kolorektalinis vėžys (APC ir CHEK2 genai)
- genetinių ligų diagnostika: hemochromatozė (HFE genas), talasemija (HBA1 ir HBA2 genai), celiakija (HLA genai)
- tėvystės testai, kuriais nustatomas vaiko ir tėvo DNR suderinamumas
Šiuo metu yra daug PGR metodo modifikacijų. Pavyzdžiui, diagnozuojant Laimo boreliozę, daugiausia naudojama įdėta PGR ir realaus laiko PGR. Pastarasis yra kiekybinis metodas, leidžiantis nustatyti tikslų Borelijos DNR kopijų skaičių išbandytoje biologinėje medžiagoje.
PGR (tyrimai) ir Laimo liga
Serologiniai tyrimai yra Laimo ligos diagnozės pagrindas. Tačiau yra klinikinių situacijų, dėl kurių šie testai gali būti klaidingai neigiami:
- serologinis langas, t. y. pradinis infekcijos laikotarpis, kai organizmas dar negamina specifinių IgM ir IgG antikūnų prieš Borrelia spirochetes
- žmonėms su imunodeficitu, kurie negamina pakankamai antikūnų
- imuninių kompleksų, kuriuos sudaro Borrelia spirochetes antigenai ir specifiniai jiems skirti antikūnai, buvimas ir neleidžia antikūnų aptikti serologiniais metodais
Jei pacientui įtariami Laimo ligos simptomai, o serologinių tyrimų rezultatai yra neigiami, galima atlikti molekulinius tyrimus, pagrįstus PGR metodu.
Borrelia spirochetes DNR galima aptikti ankstyvoje infekcijos stadijoje, nes tada kūno skysčiuose yra daugiausiai spirochetų.
Diagnozuojant Laimo boreliozę, pirmiausia naudojami tokie serologiniai metodai kaip ELISA, tačiau kai kuriose klinikinėse situacijose genetiniai tyrimai naudojant PGR metodą yra naudingi.
Kuo ilgesnis laikas nuo infekcijos, tuo mažesnė tikimybė aptikti bakterijų DNR. Todėl kai kuriais atvejais, prieš atliekant PGR tyrimą, bakterijos 1-2 savaites auginamos ant specialių terpių ir tada atliekamas tyrimas.
Šis metodas naudojamas įtariant Laimo ligą ir surinktą likvorą. Vėlyvoje infekcijos fazėje tikslingiau atlikti ELISA testą.
PCR metodas neturėtų būti naudojamas įprastai diagnozuojant Laimo boreliozę, nes trūksta standartizacijos dėl Borrelia burgdorferi veislių atsiradimo Lenkijoje.
Tačiau diagnozės sunkumų atveju (ypač ankstyvoje ligos stadijoje) PGR tyrimo rezultatas padeda diagnostikos procese.
Teigiamas tyrimo rezultatas reiškia, kad tiriamoje medžiagoje buvo nustatyta Borrelia burgdorferi DNR ir jos atmainų, tačiau tai nepaaiškina, ar organizme vyksta aktyvi infekcija. Kita vertus, neigiamas rezultatas neatmeta bakterijų buvimo organizme.
Kai kurios laboratorijos siūlo tirti, ar erkėje nėra Borrelia DNR. Tačiau tokio tyrimo rezultatas nėra pagrindas diagnozuoti Laimo ligą įkandusiam asmeniui.
Rekomenduojamas straipsnis:
ELISA testas - ką jis nustato? Kaip skaityti rezultatus? Testo kainaPGR - rezultatai. Ar jie gali būti klaidingai teigiami?
PGR yra ypač jautrus metodas ir tuo pačiu labai jautrus užterštumui. Todėl atliekant PGR pagrįstus tyrimus labai svarbu pasirinkti tinkamą vidinę kontrolę, kad būtų atmesti klaidingi teigiami rezultatai.
Svarbiausia taip pat yra teisinga bandymams skirtos medžiagos rinkimas, taip pat diagnostiką atliekančio diagnostiko patirtis ir patikimumas.
PGR - rezultatai. Ar jie gali būti klaidingai neigiami
Kaip ir atliekant bet kurį laboratorinį tyrimą, taip pat ir PGR metodą, gali pasirodyti klaidingai neigiami rezultatai. Čia labai svarbu surinkti kraują tinkamam antikoaguliantui, nes kai kurie iš jų, pavyzdžiui, heparinas, gali slopinti PGR reakciją.
Be to, medžiagos surinkimas pradėjus gydymą antibiotikais gali sumažinti PGR reakcijos efektyvumą ir didesnę klaidingai neigiamų rezultatų tikimybę.
Taip pat reikėtų nepamiršti, kad borelijų bakterijos labai trumpai gyvena kraujyje ir kūno skysčiuose, nes specialių receptorių dėka jos labai greitai prasiskverbia į „sunkiai pasiekiamas“ kūno vietas.
Todėl, priešingai nei kitų mikroorganizmų diagnostika, Borrelia spirochetų skaičius biologinėje medžiagoje yra nedidelis, kartais net esant PCR metodo aptikimo ribai. Tai taip pat gali sukelti klaidingą neigiamą.
Rekomenduojamas straipsnis:
Limfocitų transformacijos testas (LTT)Literatūra
- Dunaj J. ir kt. PGR metodo svarba diagnozuojant Laimo boreliozę. Naršyti Epidemiolis. 2013, 67, 119 - 123.
- Laboratorinė erkių platinamų ligų diagnostika. Darbo grupės rekomendacijos: Nacionaliniai laboratorinių diagnostikų rūmai, Nacionalinis visuomenės sveikatos institutas-Nacionalinis higienos institutas, Nacionalinis konsultantas infekcinių ligų srityje, Balstogės medicinos universiteto Infekcinių ligų ir neuroinfekcijų skyrius, Lenkijos virusologijos draugija, Varšuva 2014 m.
- Ružić-Sabljić E. ir Cerar T. Laimo ligos molekulinės diagnostikos pažanga. Ekspertas Rev Mol Diagn. 2017 m. Sausis; 17 (1): 19-30.
- Valones M.A.A. et al. Polimerazės grandininės reakcijos principai ir taikymas medicinos diagnostikos srityse: apžvalga. Braz J mikrobiolis. 2009 sausis-kovas; 40 (1): 1–11.
---zastosowanie-na-czym-polega-technika-pcr_1.jpg)
