ELISA testu nustatoma daugybė ligų, todėl jis plačiai pritaikytas medicinoje ir dar daugiau. Tačiau ELISA testas geriausiai žinomas dėl Laimo ligos diagnozės. Kas yra ELISA testas? Kaip interpretuoti rezultatus? Kokia yra testo kaina?
Turinys:
- ELISA testas - ką jis nustato? ELISA testo taikymas
- ELISA testas - koks yra testas?
- ELISA testas ir Laimo liga - kada atlikti?
- ELISA testas - kaina. Kiek kainuoja ELISA testas?
- ELISA testas - rezultatai. Ar jie gali būti klaidingai teigiami?
- ELISA testas - rezultatai. Ar jie gali būti klaidingai neigiami?
ELISA testas, t. Y. Su fermentais susijęs imunosorbento tyrimas, yra dažniausiai naudojamas laboratorinis metodas, kuris, be kitų, taikomas: kiekybiniam antikūnų kiekio kraujyje nustatymui.
Dėl šios priežasties ELISA testas buvo naudojamas diagnozuojant bakterines ligas, tokias kaip Laimo boreliozė.
ELISA metodo pranašumas yra jo paprastumas ir greito įdiegimo galimybė, taip pat didelis jautrumas. ELISA metodas atliekamas naudojant specialias plastikines plokšteles su duobutėmis, užpildytomis, pvz., Borrelia baltymų (antigenais) ir specifiniais monokloniniais antikūnais, kurie skirti antikūnams aptikti paciento mėginyje.
ELISA testas - ką jis nustato? ELISA testo taikymas
Dėl didelio ELISA metodo jautrumo ir paprastumo jis buvo pritaikytas diagnozuojant daugelį ligų, tačiau jis geriausiai žinomas kaip Laimo ligos diagnostinis metodas.
Laimo boreliozės diagnozės atveju vadinamasis netiesioginė ELISA, leidžianti tiriamoje medžiagoje aptikti specifinį IgM ar IgG. Tuo pačiu būdu diagnozei galima nustatyti antikūnus:
- virusinės infekcijos: herpeso virusai (herpesas, herpes zoster virusas, Epstein-Barr, citomegalovirusas), ŽIV, hepatito virusai (HBV ir HCV)
- pirmuonių infekcijos: toksoplazmozė, giardiazė
- autoimuninės ligos: celiakija (anti-tTG arba anti-DPG antikūnai), Hashimoto liga (anti-TG ir anti-TPO antikūnai), uždegiminės žarnų ligos (anti-ASCA ir anti-ANCA antikūnai)
- parazitinės ligos ir alergijos, kai nustatomi specifiniai IgE antikūnai. Padidėjęs jų lygis gali rodyti alergiją, pvz., Žiedadulkėms ir maistui, arba parazitinę invaziją (ginkluotas kaspinuočiai, žmogaus apvaliosios kirmėlės).
Taip pat yra ELISA metodo (vadinamojo sumuštinio ELISA) modifikacijų, leidžiančių aptikti baltymų, išskyrus antikūnus, mėginį. Tada bandymo tikslas yra nustatyti biologinėje medžiagoje:
- virusų ar bakterijų fragmentai, dažniausiai jie yra antigenai, būdingi tam tikram patogenui
- hormonų serume, pvz., estrogeno, prolaktino, TSH, fT4, kortizolio
- fermentai, pvz., kalprotektinas, kasos elastazė, šarminė fosfatazė
- naviko žymenys, pvz., CA-125
- vaistų buvimas serume
Šis metodas taip pat taikomas maisto pramonėje, kur jis gali aptikti alergenų (pvz., Pieno, žemės riešutų), GMO ar toksinų kiekį maiste.
ELISA testas - kas tai yra?
Pvz., Laimo boreliozės diagnozė naudojant ELISA metodą yra imuninių baltymų aptikimas biologinėje medžiagoje - antikūnai, atsirandantys atsako prieš Borrelia antigenus metu.
Antikūnai tiriami dviem klasėmis - IgM ir IgG. IgM yra pirmieji antikūnai, atsirandantys organizme, kai jie liečiasi su bakterijomis, ir laikui bėgant jie mažėja.
Jų vietą užima patvaresni IgG antikūnai, kurie organizme gali likti kelias dešimtis metų.
Tokiu būdu netiesiogiai tikrinamas bakterijų buvimas organizme, nustatant antikūnus, specialiai nukreiptus prieš Borrelia spirochetes.
Antikūnai įvairiais infekcijos etapais gali būti nukreipti prieš įvairius Borrelia baltymus. Pavyzdžiui, ankstyvoje stadijoje tai yra p41 baltymas.
Vėlesnėse stadijose pradeda atsirasti vis daugiau baltymų, tokių kaip p21, p30, p39, p43. Štai kodėl Laimo ligą diagnozuoti yra itin sunku.
Bakterinių baltymų parinkimas yra nepaprastai svarbus, kad tyrimas turėtų didelę diagnostinę vertę. Todėl įprastai diagnozuojant Laimo ligą, reikia naudoti II ar III kartos ELISA testus, kuriuose atrenkami baltymų rinkiniai, kad gautų patikimiausią rezultatą.
ELISA testas ir Laimo liga. Kada daryti?
Laimo boreliozė yra bakterinė liga, kurią sukelia Borrelia burgdorferi bakterijos ir daugybė jos veislių.
Ligos diagnozė nėra lengva dėl sudėtingo imuninio atsako prieš Borrelia ir laboratorinių metodų trūkumų.
Dažniausiai naudojamas laboratorinis metodas yra labai jautrus ELISA metodas, kuriuo nustatomi specifiniai antikūnai, išauginti prieš bakterijų baltymus.
Diagnozuojant Laimo ligą, naudojamas netiesioginis ELISA metodas, kuriame išskiriami šie etapai:
- šulinių inkubavimas lėkštėje su medžiaga, surinkta iš paciento, pvz., serumas. Jei tiriamoje medžiagoje yra antikūnų prieš borelijas, jie gerai prisijungia prie baltymų reakcijos dugne
- tada serumo perteklius nuplaunamas specialiu skalbimo skysčiu (buferiu) ir vadinamasis konjugatas, t. y. antikūnas, susietas su fermentu, kuris jungiasi su anksčiau susietais antikūnais reakcijos duobėse
- tada pridedamas konjugato substratas ir įvyksta spalvos reakcija (teigiamas rezultatas) arba nėra spalvos reakcijos (neigiamas rezultatas)
- paskutinis žingsnis yra skaitytojo (spektrofotometro) nuskaityta antikūnų prieš Borrelia koncentracija paciento serume
ELISA testas dėl Laimo ligos atliekamas iš kraujo, o esant neurologiniams simptomams (neuroborreliozei), taip pat iš smegenų skysčio.
Sinovinio skysčio tirti nereikėtų, nes yra didelė klaidingai teigiamų rezultatų tikimybė.
Ligos diagnozės pagrindas yra tai rodantys klinikiniai simptomai, patvirtinti laboratorinių tyrimų rezultatais.
Pridedant laboratorinių tyrimų rezultatą be simptomų, negalima nustatyti Laimo ligos diagnozės, nes įrodyta, kad antikūnai prieš borelijas aptinkami ir sveikiems žmonėms.
Laimo boreliozės serologinė diagnozė pradedama pusiau kiekybiniu atrankiniu ELISA testu. Jei rezultatas yra neigiamas, tai reiškia, kad Borrelia spirochetes nebuvo aptikta arba rezultatas buvo klaidingai neigiamas.
Jei rezultatas yra teigiamas arba silpnai teigiamas (dviprasmiškas), reikia atlikti patvirtinamąjį Western blot testą, kuriam būdingas didelis specifiškumas.
Tai patvirtina, kad ELISA rezultatai yra „teisingi“. Vykdant diagnostiką negalima praleisti nė vieno iš pirmiau nurodytų žingsnių ir, pavyzdžiui, nedelsiant atlikti diagnozę taikant Western blot metodą arba nustatyti diagnozę remiantis vien tik teigiamu ELISA rezultatu.
Lenkijoje Laimo liga diagnozuojama labai dažnai pasibaigus pirmajai atrankos stadijai, o tai lemia klaidingą teigiamų ar silpnai teigiamų rezultatų interpretaciją.
Rekomenduojamas straipsnis:
Limfocitų transformacijos testas (LTT) Verta žinotiELISA testas - kaina. Kiek kainuoja ELISA testas?
Testas kainuoja apie 60 PLN ir atliekamas iškart. Tačiau persiuntimo rezultatų galite laukti apie tris mėnesius.
ELISA testas - rezultatai. Ar jie gali būti klaidingai teigiami?
Klaidingai teigiami rezultatai atsiranda dėl kryžminio IgM antikūnų reakcijos su kitais baltymais. Kūno gaminami antikūnai gali „neteisingai“ atpažinti kitų mikroorganizmų antigeną kaip borelijos antigeną.
Dažniausiai pasitaikančios „klaidos“ pasitaiko žmonėms, užkrėstiems treponema pallidum, herpeso virusais, žmonėms, sergantiems sistemine raudonąja vilklige ir kitomis reumatinėmis ligomis.
ELISA testas - rezultatai. Ar jie gali būti klaidingai neigiami?
Klaidingai neigiami rezultatai gali pasirodyti ankstyvoje infekcijos stadijoje, tada tyrimą reikia pakartoti maždaug po 3-4 savaičių. Tai vadinama serologinis langas, tai yra pradinis infekcijos laikotarpis, kai organizmas dar „nespėjo“ gaminti specifinių antikūnų.
Tas pats pasakytina apie žmones, turinčius imunodeficito, kurie negamina pakankamai antikūnų.
Didelė problema, ypač esant labai intensyvioms infekcijoms, yra vadinamųjų atsiradimas imuniniai kompleksai, susidedantys iš Borrelia spirochetes antigenų ir jiems būdingų antikūnų.
Todėl antikūnai tampa „nematomi“ dažniausiai naudojamiems metodams, tokiems kaip ELISA, ir, nors jų yra tiriamoje medžiagoje, jų aptikti negalima.
Tokiais atvejais laboratorija gali naudoti imuninės sistemos skaidymą. Šis gydymas skirtas išlaisvinti antikūnus. Tačiau šis metodas nėra plačiai naudojamas, nes laboratorijose nėra standartizacijos.
Verta žinotiKodėl Laimo ligą diagnozuoti nėra lengva?
Taip yra dėl imuninio atsako prieš Borrelia sudėtingumo ir laboratorinių metodų ribotumo. Veislių įvairovė ir naujų, sukeliančių infekcijas, atsiradimas, ypač Europos žemyne, nepadeda kurti veiksmingų diagnostikos metodų.
Neseniai Europoje atsirado daugiau veislių, tokių kaip Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana ir Borrelia spielmanii. Be to, organizme Borrelia spirochetes gali virsti cistomis arba likti tose kūno vietose, kur imuninės sistemos ląstelės nepasiekia.
Būdamas taip „nematomas“ imuninei sistemai. Be to, buvo įrodyta, kad audiniuose gali būti bakterijų fragmentų, turinčių stipriai uždegimą skatinančių savybių. Manoma, kad jie yra atsakingi už chroniškus Laimo ligos simptomus, nepaisant neigiamų laboratorinių tyrimų rezultatų.
Literatūra
1. Witecka-Knysz E. ir kt. Laimo liga: kodėl diagnozuoti taip sunku? Laboratorijos diagnostikas 2007 m. Balandžio mėn.
2. Moore A. ir kt. Dabartinės Laimo ligos laboratorinės diagnostikos gairės, bendros klinikinės spąstai ir būsimos kryptys, Jungtinės Valstijos. Skubios infekcijos dis. 2016 m. Liepos mėn. 22 (7).
3. Laboratorinė erkių platinamų ligų diagnostika. Darbo grupės rekomendacijos: Nacionaliniai laboratorinių diagnostikų rūmai, Nacionalinis visuomenės sveikatos institutas-Nacionalinis higienos institutas, Nacionalinis konsultantas infekcinių ligų srityje, Balstogės medicinos universiteto Infekcinių ligų ir neuroinfekcijų skyrius, Lenkijos virusologijos draugija, Varšuva 2014 m.
4. Hosseini S. ir kt.: Su fermentais susijęs imunosorbento tyrimas (ELISA) nuo A iki Z. Springer 2017.
